細(xì)胞名稱 肝癌細(xì)胞；PLC/PRF/5
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞系分泌乙肝病毒表面抗原（HBsAg）。此細(xì)胞系原先被支原體污染，后用BM-cycline去除支原體。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法: 消化5-10分鐘。1:2。3-4天長滿。
傳代情況: P80
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品名稱 | 肝癌細(xì)胞；PLC/PRF/5 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63474 |
產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
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rmPlexin C1, CF細(xì)胞名稱: 小鼠骨髓瘤細(xì)胞；Sp2/0-Ag14 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
rmPlexin A1, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 豬腎傳代細(xì)胞；IBRS－2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
rmPlexin A1, CF細(xì)胞名稱: 小鼠腫瘤細(xì)胞
L-色氨 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-氟酮
Fmoc-纈氨 CrkL (D4G7G) Rabbit mAb-2-氟甲酸
D-纈氨 Phospho-PLCγ2 (Tyr1217) Antibody氨基-2-氟甲酸
L-甘氨 Phospho-PLCγ2 (Tyr1217) Antibody2-溴-氟甲
BOC-L-脯氨 CD133 (A8N6N) Mouse mAb (Flow Specific) (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2--4,6-二甲基嘧啶
氨基縮二甲 PLCγ2 Antibody2--2-基酮
絲氨,2-氨基-1, PLCγ2 AntibodyN-芐氧羰基-D-天冬酰
N-甲基-D-天α-Tubulin (DM1A) Mouse mAb酰氧基*基化銨
APMSF(進分)α-Tubulin (DM1A) Mouse mAb6,11-二氫二并[b,e]氧雜卓-11-酮
(1R,2S)-1-氨基-2-茚 Phospho-PLCγ2 (Tyr759) Antibody2-溴-5-氟甲
N-BOC-D-色氨Phospho-PLCγ2 (Tyr759) Antibody鄰三氟甲氧基
DL-甘氨 Aurora Antibody Sampler Kit氟甲酸酯
2-氨基吡啶-甲 JARID1A (D28B10) Rabbit mAb2,二氟甲酸
-L- JARID1A (D28B10) Rabbit mAb2,二氟
雙甘氨二肽CD28 (D2Z4E) Rabbit mAb2-溴-氟甲
Phospho-Vimentin (Ser56) AntibodyBOC-L-5甲酯
人胰島素Phospho-Vimentin (Ser56) Antibody溴-氟甲
特力利汀;替格列汀Phospho-Vimentin (Ser83) Antibody2,二氟甲
硝酸舍他康唑Phospho-Vimentin (Ser83) Antibody2--5-氟
草津，草凈津Snail (C15D3) Rabbit mAb3,二羥
醋酸依降鈣素 Snail (C15D3) Rabbit mAb甲酯
醋酸恩夫韋地 Phospho-FRA1 (Ser265) Antibody氟-甲酸
D-海藻糖無水Phospho-Gab2 (Tyr452) Antibody哌啶酸鹽
二醋酸(LH-RH)Phospho-Gab2 (Tyr452) (C33G1) Rabbit mAb*基-1,二
醋酸戈舍瑞林 Phospho-Gab2 (Tyr452) (C33G1) Rabbit mAb溴-三氟甲
醋酸亮瑞林 Phospho-Gab2 (Ser159) Antibody2-溴-5-三氟甲
醋酸組氨瑞林 ERCC1 Antibody三氟甲
VGlycogen Synthase (15B1) Rabbit mAb1,8-二溴辛烷
2'-脫氧NuMA Antibody對氟甲砜
鹽酸尼非卡蘭MAGE-A3 (E9S4X) Rabbit mAb3'-氟酮
鹽酸尼非卡蘭(標(biāo)準(zhǔn)品)HS1 (D83A8) XP® Rabbit mAb ( Specific)間氟甲酸
辛卡利特 ARC (D7Q3G) Rabbit mAb吡啶硫
α1 Phospho-Glycogen Synthase (Ser641) Antibody氟甲酸甲酯
奧比沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)2-氟-甲
奧比沙星 Phospho-PKC (pan) (gamma Thr514) (D6Y3D) Rabbit mAb4,4,5,5,6,6-七氟-1-(2-噻吩基)-1,己二酮
醋酸β4 Glycogen Synthase Antibody對氟甲酸
H-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rmPDGF Rb/Fc, CF (100 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆；L-929[L929] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
肝癌細(xì)胞；PLC/PRF/5人高速泳動蛋白17(HMG-17)ELISA試劑盒MIP-1αELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人低分子量細(xì)胞角蛋白(CK-LMW)ELISA試劑盒MIP-1αELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人多肽YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒MIP-1αELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)ELISA試劑盒MIP-1βELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒MIP-1βELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人副甲狀旁腺激素相關(guān)肽(PTHrp)ELISA試劑盒MIP-1βELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人甘丙肽/甘丙素(GAL)ELISA試劑盒MIP-2ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒MIP-2ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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