產(chǎn)品簡介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測小鼠組織勻漿、免疫細胞提取物中的 RAR 的相關(guān)孤獨受體 C(RORC)蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于 Th17 細胞分化、免疫調(diào)控、自身免疫病及核受體信號研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:小鼠RAR的相關(guān)孤獨受體C(RORC)elisa試劑盒
英文名稱:RORC ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號:CS-1329E
檢測原理:

小鼠 RAR 的相關(guān)孤獨受體 C (RORC) elisa 試劑盒的原理是雙抗體夾心法,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標記的檢測抗體進行識別,最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
固相化:微孔板預(yù)先包被抗小鼠 RORC 抗體。
結(jié)合:加入標準品或樣本,RORC 被固相抗體捕獲。
檢測:加入生物su化的抗小鼠 RORC 抗體和 HRP 標記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復(fù)合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
測定:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?:

?1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫(20–25℃,≥30min);濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復(fù)溶,梯度稀釋,配置系列濃度梯度標準溶液,備用。
2. 實驗流程
加樣:設(shè)置空白孔、標準孔、樣本孔,每孔加入 100 μL 對應(yīng)標準品 / 待測樣本,封板,37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌:棄凈孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌工作液,靜置 30 s,甩干拍凈,重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物:每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體,封板混勻,37℃孵育 60 min。
洗滌:重復(fù)上述洗滌步驟 5 次,拍干微孔。
顯色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻,37℃避光顯色 15 min。
終止:按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液,輕晃混勻,溶液由藍轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù):15 min 內(nèi),酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值,擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點
全程孵育使用專用封板膜,防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心,殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存,現(xiàn)用現(xiàn)加,嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致,避免局部色差、綠色殘留。
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操作步驟?:

?1、試劑與樣本準備?:
將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),按說明書稀釋洗滌緩沖液(通常1:19)。
?標準品?:用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?:血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高,可按說明書(如1:10)稀釋。
?2、加樣與孵育?:
每孔加入100μL標準品或樣本。
輕輕振蕩混勻,避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘(部分試劑盒可能為120分鐘,需以說明書為準)。
?3、洗滌?:
棄去孔內(nèi)液體,用洗滌緩沖液加滿每孔,靜置30秒后甩干,重復(fù)5-6次。
4?、加檢測抗體與孵育?:
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?:
同步驟3,洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?:
每孔加入90-100μL TMB底物混合液(A液+B液)。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測定?:
每孔加入50μL終止液,立即混勻(顏色由藍變黃)。
在加終止液后15分鐘內(nèi),用酶標儀在450nm波長處測定各孔吸光度(OD值)。