產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專(zhuān)用于定量檢測(cè)小鼠組織勻漿、細(xì)胞提取物中的二酰基甘油(DAG/DG)含量。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、磷脂代謝及蛋白激酶 C 通路研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱(chēng):小鼠二酰基甘油(DAG/DG)elisa試劑盒
英文名稱(chēng):DAG/DG ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào):CS-1134E
檢測(cè)原理:

小鼠二酰基甘油 (DAG/DG) elisa 試劑盒的原理是競(jìng)爭(zhēng)法,通過(guò)固相載體包被抗原與樣本抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體,再用酶標(biāo)抗體識(shí)別,最后通過(guò)底物顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)。
固相化:微孔板預(yù)先包被 DAG 人工抗原。
結(jié)合:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,樣本 DAG 與固相 DAG 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體。
檢測(cè):加入酶標(biāo)特異性抗體,形成抗原抗體復(fù)合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成反比。
實(shí)驗(yàn)步驟?:

?試劑準(zhǔn)備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后甩干,重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?:每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍(lán)變黃)。
?檢測(cè)?:450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?:

?1、試劑與樣本準(zhǔn)備?:
將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),按說(shuō)明書(shū)稀釋洗滌緩沖液(通常1:19)。
?標(biāo)準(zhǔn)品?:用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?:血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高,可按說(shuō)明書(shū)(如1:10)稀釋。
?2、加樣與孵育?:
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。
輕輕振蕩混勻,避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘(部分試劑盒可能為120分鐘,需以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn))。
?3、洗滌?:
棄去孔內(nèi)液體,用洗滌緩沖液加滿(mǎn)每孔,靜置30秒后甩干,重復(fù)5-6次。
4?、加檢測(cè)抗體與孵育?:
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測(cè)抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?:
同步驟3,洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?:
每孔加入90-100μL TMB底物混合液(A液+B液)。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測(cè)定?:
每孔加入50μL終止液,立即混勻(顏色由藍(lán)變黃)。
在加終止液后15分鐘內(nèi),用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(OD值)。