本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)蛋白濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL,靈敏度達0.16 ng/mL,適用于能量代謝調控、細胞應激反應及代謝相關疾病研究等領域。
產品名稱 |
小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶elisa試劑盒 | 英文名稱 | pAMPK ELISA Kit |
貨號 | CS-0901E | 規格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理:

?固相化?:微孔板預先包被抗小鼠pAMPK抗體。
?結合?:加入標準品或樣本,pAMPK被固相抗體捕獲。
?檢測?:加入化的抗小鼠pAMPK抗體和HRP標記的親和素,形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。
?顯色?:加入TMB底物,被HRP催化后由藍色變為黃色。
?測定?:用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值),濃度與OD值成正比。
樣本要求:

1. 樣本類型與處理
?血清?:使用無熱原/內毒素試管采集,避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清,-20℃保存,避免反復凍融。
?血漿?:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,離心后取上清。
?細胞上清?:1000×g離心10分鐘去除顆粒,-70℃保存。
?組織勻漿?:生理鹽水勻漿后離心取上清,-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3,以免抑制HRP活性。
細胞培養上清可能因細胞狀態等因素導致檢測波動,建議設復孔。
操作步驟:

試劑準備將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標準品按說明書進行梯度稀釋,配制系列濃度標準曲線溶液。
實驗流程加樣:設置空白孔、標準孔、待測樣品孔,空白孔僅加稀釋液,其余孔分別加入標準品或待測樣品,37℃孵育。加酶標抗體:除空白孔外,每孔加入酶標抗體,輕輕混勻,37℃避光孵育。洗滌:棄去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后甩干,重復洗滌 4-5 次,最后拍干殘留液體。顯色:每孔加入 TMB 顯色液,37℃避光孵育,孔內呈現藍色。終止:每孔加入終止液,混勻后顏色由藍色轉為黃色。檢測:在 450nm 波長下測定各孔 OD 值,15 分鐘內完成讀數。
關鍵提示實驗全程嚴格控溫,孵育時使用封板膜避免蒸發。洗滌需充分,否則易造成高背景、結果偏差。顯色液需避光,終止順序與加樣順序保持一致,確保充分混勻。
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