激肽釋放酶2Elisa試劑盒質控質檢操作流程
點擊次數：1516 更新時間：2022-07-21
激肽釋放酶裂解激肽原產生激肽，主要有緩激肽、胰激肽及蛋氨酰胰激肽，賴氨酰緩激肽可被尿液及血液中的氨基肽酶降解為緩激肽。因都具有緩激肽的結構，故作用相似，其中緩激肽作用最強，胰激肽的活性只有緩激肽的1/2，而蛋氨酰胰激肽的活性則只有其1/3。激肽與激肽受體結合后參與機體許多組織器官的功能調節和病理生理過程。
激肽釋放酶2Elisa試劑盒質控質檢操作流程：
?。?）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
?。?）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
（5）酶標板置37℃箱的濕盒內，孵育60min。
（6）洗板，陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
?。?）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔工作液100μl。
（8）酶標板置37℃箱的濕盒內，孵育60min。
?。?）洗板，陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
（10）每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
（11）每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。
?。?2）分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以由容器上的劃痕或指印等造成的光。
（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。
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